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簡(jiǎn)述微型生物反應(yīng)器的標(biāo)準(zhǔn)化操作流程

更新時(shí)間:2026-02-02點(diǎn)擊次數(shù):122
   微型生物反應(yīng)器作為高通量篩選、菌種優(yōu)化與工藝開發(fā)的核心工具,廣泛應(yīng)用于合成生物學(xué)、制藥研發(fā)及發(fā)酵工程領(lǐng)域。其以小體積、高精度控制和并行化操作優(yōu)勢(shì),顯著提升實(shí)驗(yàn)效率。若操作不規(guī)范,易導(dǎo)致染菌、參數(shù)漂移、溶氧不足或細(xì)胞損傷,影響數(shù)據(jù)可靠性。遵循微型生物反應(yīng)器無菌化、標(biāo)準(zhǔn)化、智能化的操作流程,是實(shí)現(xiàn)控得精、養(yǎng)得穩(wěn)、測(cè)得準(zhǔn)的前提。

 


  一、使用前準(zhǔn)備
  系統(tǒng)滅菌:
  反應(yīng)罐體、管路及傳感器接口須經(jīng)高壓蒸汽滅菌(121℃,20min)或在線SIP(在位滅菌);
  pH/DO電極使用前活化(DO膜更換、pH電極浸泡于緩沖液);
  參數(shù)校準(zhǔn):
  pH校準(zhǔn):用標(biāo)準(zhǔn)緩沖液(pH4.01、7.00)兩點(diǎn)校正;
  DO校準(zhǔn):零點(diǎn)(亞*溶液)與滿度(空氣飽和水)校準(zhǔn);
  培養(yǎng)基準(zhǔn)備:
  過濾除菌(0.22μm)或同步滅菌,避免沉淀堵塞補(bǔ)料管。
  二、規(guī)范接種與運(yùn)行流程
  接種操作:
  在生物安全柜中進(jìn)行,火焰灼燒接種口,快速注入種子液(通常5–10%v/v);
  參數(shù)設(shè)定:
  根據(jù)菌種需求設(shè)置:
  溫度(如大腸桿菌37℃,酵母30℃);
  攪拌轉(zhuǎn)速(200–1000rpm,避免剪切力損傷細(xì)胞);
  通氣量(0.1–1vvm),搭配氣體混合調(diào)控DO與pH;
  實(shí)時(shí)監(jiān)控:
  啟用自動(dòng)反饋控制:DO低于設(shè)定值時(shí)自動(dòng)提轉(zhuǎn)速或增氧;pH偏離時(shí)觸發(fā)電動(dòng)泵補(bǔ)酸/堿。
  三、使用后處理
  實(shí)驗(yàn)結(jié)束,先關(guān)閉加熱與攪拌,再停氣;
  排空廢液,用去離子水沖洗內(nèi)壁,防止殘留物干結(jié);
  pH/DO電極按規(guī)范保存(pH電極存于3MKCl,DO膜干燥避光);
  導(dǎo)出全過程數(shù)據(jù)(OD、pH、DO、溫度曲線),生成合規(guī)報(bào)告。
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